Calcein-AM
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產(chǎn)品英文名稱:Calcein-AM
產(chǎn)品中文名稱:Calcein-AM 細胞染色劑
Calcein-AM 產(chǎn)品簡介
分 子 式: C46H46N2O23
分 子 量: 994.86
外 觀: 白色或淺黃色晶體
別 名: 鈣黃綠素
純 度: 90%以上(HPLC)
儲存條件: -20℃
運輸條件: 室溫
Calcein-AM 產(chǎn)品描述
Calcein-AM是一種可對活細胞進行熒光標記的細胞染色試劑,由于它在Calcein的基礎上加強了疏水性,因此能夠輕易穿透活細胞膜。當其進入到細胞質后,酯酶會將其水解為Calcein留在細胞內,發(fā)出強綠色熒光。與其它同類試劑(如BCECF-AM和Carboxy-fluorescein diacetate) 相比,Calcein-AM是最適合作為熒光探針去染活細胞的,因為它的細胞毒性很低。Calcein不會抑制任何的細胞功能如增殖或淋巴球的趨化性。使用了Calcein的活性檢測的實驗結果是十分可信并且與標準的51Cr-釋放法所得結果相一致的。Calcein的激發(fā)和發(fā)射波長分別為490 nm和515 nm。
Calcein-AM可與PI結合使用,分別對活細胞和死細胞染色,可用于同時對活細胞和死細胞進行熒光染色。
Calcein-AM 產(chǎn)品特性
Calcein-AM是一種可對活細胞進行熒光標記的細胞染色試劑,Calcein-AM由于在Calcein(鈣黃綠素)的基礎上加強了疏水性,因此能夠輕易穿透活細胞膜。當其進入到細胞質后,酯酶會將其水解為Calcein(鈣黃綠素)留在細胞內,發(fā)出強綠色熒光。與其它同類試劑(如BCECF-AM和Carboxy-fluorescein diacetate)相比,Calcein-AM是最適合作為熒光探針去染活細胞的,因為它的細胞毒性很低。Calcein(鈣黃綠素)不會抑制任何的細胞功能如增殖或淋巴球的趨化性。另外,使用了Calcein(鈣黃綠素)的活性檢測的實驗結果是十分可信并且與標準的51Cr-釋放法所得結果相一致的。Calcein(鈣黃綠素)的激發(fā)和發(fā)射波長分別為490 nm和515 nm。
Calcein-AM和碘化丙啶(PI)溶液,它們分別可對活細胞和死細胞染色。Calcein-AM的乙酸甲基酯親脂性很高,使其可透過細胞膜,通過活細胞內的酯酶作用,Calcein-AM能脫去AM基,產(chǎn)生的Calcein(鈣黃綠素)能發(fā)出強綠色熒光,因此Calcein-AM僅對活細胞染色。另一方面,作為核染色染料的PI不能穿過活細胞的細胞膜。它穿過死細胞膜的無序區(qū)域而到達細胞核,并嵌入細胞的DNA雙螺旋從而產(chǎn)生紅色熒光(激發(fā):535 nm,發(fā)射:617 nm),因此PI僅對死細胞染色。由于Calcein(鈣黃綠素)和PI-DNA都可被490 nm激發(fā),因此可用熒光顯微鏡同時觀察活細胞和死細胞。用545 nm激發(fā),僅可觀察到死細胞。根據(jù)以上特點,Calcein-AM和碘化丙啶(PI)經(jīng)常被結合用來作為活細胞和死細胞的雙重染色。
由于不同細胞系的最佳染色條件不同,我們建議個別確定Calcein-AM和PI的合適濃度。
Calcein-AM 使用注意事項
1、試劑容易吸潮,從冰箱取出后,請確認在干燥的環(huán)境放至室溫后再開封。由于試劑極其微量,開封前,請輕彈管壁幾次,以保證粉末落入管底。
2、第一次使用時, 建議母液即配即用。試劑溶解后盡可能在短時間內使用,以保證實驗效果。
3、溶解液DMSO需要保證新鮮無水,否則將會導致AM體水解,使熒光染料無法進入細胞,影響實驗效果。
4、母液遇水極易分解,如果不能一次用完,建議分裝保存,例如分裝成5 μl/管,用封口膜封口,并用鋁箔紙包裹,放在一個密閉性能好的塑料袋中,并放入一包干燥劑,在≤-20℃密封避光保存。
5、建議您在正式實驗前先摸索一下細胞量、染色試劑的終濃度、培養(yǎng)時間等,找到最佳實驗條件。
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