細胞傳代是細胞培養(yǎng)的基礎操作，解離試劑直接決定細胞活力與后續(xù)實驗結果。很多科研人員在做干細胞、流式樣本時，會尋找比胰酶更溫和的消化試劑，A6964-100ML Merck-sigma Accutase? 溶液就是廣受科研人員認可的細胞脫壁試劑，華雅思創(chuàng)現(xiàn)貨供應，為實驗室試劑采購提供穩(wěn)定貨源。

?一、細胞解離試劑選型要點

1. 細胞保護能力：敏感細胞、干細胞、原代細胞不能使用強消化試劑，需選擇低損傷配方，保護細胞表面蛋白。
2. 組分純凈度：動物源成分會引入未知雜質，高標準實驗優(yōu)先選擇無動物源試劑。
3. 無菌質控：細胞培養(yǎng)試劑必須無菌，低內毒素，避免微生物污染影響細胞生長。
4. 使用便捷性：優(yōu)先選擇即用型成品試劑，省去配制、過濾滅菌的人工成本。
5. 適用性：試劑需要適配多種細胞類型，同時兼容普通培養(yǎng)板與包被型培養(yǎng)載體。

?二、A6964 Accutase? 溶液 適配高標準細胞實驗需求

A6964-100ML Merck-Sigma Accutase? 溶液是成熟的商品化細胞解離液，核心特點：

– 復合酶體系，溫和分解細胞與培養(yǎng)皿之間的粘附結構，短時間完成細胞脫附，減少長時間酶解帶來的細胞凋亡。

– 無動物源組分，減少外源蛋白干擾，適合細胞表面標志物分析、單細胞測序前樣本制備。

– 無菌過濾、低內毒素，批次穩(wěn)定性好，不同批次之間酶活波動小，實驗重復性佳。

– 溶劑為無鈣鎂 DPBS，體系穩(wěn)定，解凍后直接使用，無需額外調配。

– 適用細胞種類豐富，覆蓋各類腫瘤細胞系、干細胞、原代分離細胞。

?三、對比傳統(tǒng)胰酶，有哪些差異化優(yōu)勢

常規(guī)胰酶消化力度強，容易破壞細胞膜表面抗原，對于干細胞、原代細胞容易造成大量細胞死亡；部分實驗還需要血清或胰酶抑制劑終止反應，增加操作步驟。

Accutase? A6964 配方更柔和，細胞損傷更低，保留表面標記，很多場景不用終止反應，在流式、單細胞樣本制備中優(yōu)勢明顯，是很多高分文獻里常用的解離試劑。

A6964-100ML Merck-Sigma Accutase? 溶液說明

General description

憑借有效的作用和對不同類型細胞的耐受性以及血清誘導的中和作用，胰蛋白酶可用于組織解離。

Application

來自豬胰腺的胰蛋白酶已被用于消化雞骨頭。它還被用于分離黃體內皮細胞。。

對于胰蛋白酶消化肽，胰蛋白酶:肽的使用比例約為1:100至1:20。本品的典型用途是使貼壁細胞從培養(yǎng)表面脫落。 使細胞解離所需的胰蛋白酶濃度主要取決于細胞類型和培養(yǎng)物代數(shù)。 Trypsins也被用于細胞培養(yǎng)過程中的細胞再懸浮，在蛋白質組學研究中用于蛋白質的消化，以及在各種凝膠消化中。 其他的應用包括通過基于膜的技術評估結晶，以及在一項研究中確定蛋白質折疊速率和產量可以被動力學陷阱的存在所限制。

Biochem/physiol Actions

胰蛋白酶可切割賴氨酸和精氨酸殘基的C末端肽段。 如果酸性殘基位于切割位點的任意一側，則該反應的水解速度減慢，并且如果脯氨酸殘基位于切割位點的羧基側，則水解停止。 胰蛋白酶活性的最佳pH條件為7-9。 胰蛋白酶還可以切割氨基酸合成衍生物的酯和酰胺鍵。 將EDTA添加到胰蛋白酶溶液中作為螯合劑，用于中和鈣離子和鎂離子以防止其抑制胰蛋白酶活性。 去除這些離子會增加酶活性。

絲氨酸蛋白酶抑制劑（包括DFP、TLCK、APMSF、AEBSEF和抑肽酶等）會抑制胰蛋白酶。

Preparation Note

本品為凍干粉，可以25mg/mL溶于Hank′s平衡鹽溶液。

對于需要EDTA的應用，溶解胰蛋白酶應該使用不含Ca2+ 或 Mg2+的緩沖鹽溶液.

Other Notes

一個BAEE單位以BAEE作為底物，在25°C、pH 7.6條件下每分鐘每毫升產生0.001的ΔA253 。一個BTEE單位=320個ATEE單位。反應體積=3.2mL（1cm的光徑）。

胰蛋白酶是由含223個氨基酸殘基的單鏈多肽組成的，它通過切割胰蛋白酶原的Lys-1le肽鍵以去除N-末端六肽而獲得。 氨基酸序列通過6個二硫鍵交聯(lián)。 這是天然形式的胰蛋白酶——β-胰蛋白酶。 β-胰蛋白酶可以自溶，在Lys-Ser殘基處斷裂，產生α-胰蛋白酶。 胰蛋白酶是絲氨酸蛋白酶家族的成員。

Disclaimer

溶于1mM HCl的溶液分裝后可在-20℃穩(wěn)定保存1年。Ca2+ 的存在也會降低胰蛋白酶的自水解性，保持其在溶液中的穩(wěn)定性。 胰蛋白酶也將在2.0 M尿素、2.0 M鹽酸胍或0.1% (w/v) SDS中保持大部分活性。

?四、華雅思創(chuàng)現(xiàn)貨保障，冷鏈配送

華雅思創(chuàng)專注進口生物試劑、細胞培養(yǎng)耗材供應，Merck-Sigma A6964-100ML Accutase? 溶液庫存充足，支持冷鏈干冰發(fā)貨，可提供產品相關資質文件。科研機構、生物企業(yè)可批量采購，避免試劑斷貨耽誤細胞傳代與樣本制備工作。

細胞解離試劑選型，細胞活性、組分純度、批次穩(wěn)定性是核心考量。A6964-100ML Merck-Sigma Accutase? 溶液適合對細胞保護要求高的實驗，華雅思創(chuàng)現(xiàn)貨供應，是細胞實驗室采購的可靠選擇。