細胞傳代是細胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)操作，解離試劑直接決定細胞活力與后續(xù)實驗結(jié)果。很多科研人員在做干細胞、流式樣本時，會尋找比胰酶更溫和的消化試劑，A6964-100ML Merck-sigma Accutase? 溶液就是廣受科研人員認(rèn)可的細胞脫壁試劑，華雅思創(chuàng)現(xiàn)貨供應(yīng)，為實驗室試劑采購提供穩(wěn)定貨源。

?一、細胞解離試劑選型要點

1. 細胞保護能力：敏感細胞、干細胞、原代細胞不能使用強消化試劑，需選擇低損傷配方，保護細胞表面蛋白。
2. 組分純凈度：動物源成分會引入未知雜質(zhì)，高標(biāo)準(zhǔn)實驗優(yōu)先選擇無動物源試劑。
3. 無菌質(zhì)控：細胞培養(yǎng)試劑必須無菌，低內(nèi)毒素，避免微生物污染影響細胞生長。
4. 使用便捷性：優(yōu)先選擇即用型成品試劑，省去配制、過濾滅菌的人工成本。
5. 適用性：試劑需要適配多種細胞類型，同時兼容普通培養(yǎng)板與包被型培養(yǎng)載體。

?二、A6964 Accutase? 溶液 適配高標(biāo)準(zhǔn)細胞實驗需求

A6964-100ML Merck-Sigma Accutase? 溶液是成熟的商品化細胞解離液，核心特點：

– 復(fù)合酶體系，溫和分解細胞與培養(yǎng)皿之間的粘附結(jié)構(gòu)，短時間完成細胞脫附，減少長時間酶解帶來的細胞凋亡。

– 無動物源組分，減少外源蛋白干擾，適合細胞表面標(biāo)志物分析、單細胞測序前樣本制備。

– 無菌過濾、低內(nèi)毒素，批次穩(wěn)定性好，不同批次之間酶活波動小，實驗重復(fù)性佳。

– 溶劑為無鈣鎂 DPBS，體系穩(wěn)定，解凍后直接使用，無需額外調(diào)配。

– 適用細胞種類豐富，覆蓋各類腫瘤細胞系、干細胞、原代分離細胞。

?三、對比傳統(tǒng)胰酶，有哪些差異化優(yōu)勢

常規(guī)胰酶消化力度強，容易破壞細胞膜表面抗原，對于干細胞、原代細胞容易造成大量細胞死亡；部分實驗還需要血清或胰酶抑制劑終止反應(yīng)，增加操作步驟。

Accutase? A6964 配方更柔和，細胞損傷更低，保留表面標(biāo)記，很多場景不用終止反應(yīng)，在流式、單細胞樣本制備中優(yōu)勢明顯，是很多高分文獻里常用的解離試劑。

A6964-100ML Merck-Sigma Accutase? 溶液說明

General description

憑借有效的作用和對不同類型細胞的耐受性以及血清誘導(dǎo)的中和作用，胰蛋白酶可用于組織解離。

Application

來自豬胰腺的胰蛋白酶已被用于消化雞骨頭。它還被用于分離黃體內(nèi)皮細胞。。

對于胰蛋白酶消化肽，胰蛋白酶:肽的使用比例約為1:100至1:20。本品的典型用途是使貼壁細胞從培養(yǎng)表面脫落。 使細胞解離所需的胰蛋白酶濃度主要取決于細胞類型和培養(yǎng)物代數(shù)。 Trypsins也被用于細胞培養(yǎng)過程中的細胞再懸浮，在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中用于蛋白質(zhì)的消化，以及在各種凝膠消化中。 其他的應(yīng)用包括通過基于膜的技術(shù)評估結(jié)晶，以及在一項研究中確定蛋白質(zhì)折疊速率和產(chǎn)量可以被動力學(xué)陷阱的存在所限制。

Biochem/physiol Actions

胰蛋白酶可切割賴氨酸和精氨酸殘基的C末端肽段。 如果酸性殘基位于切割位點的任意一側(cè)，則該反應(yīng)的水解速度減慢，并且如果脯氨酸殘基位于切割位點的羧基側(cè)，則水解停止。 胰蛋白酶活性的最佳pH條件為7-9。 胰蛋白酶還可以切割氨基酸合成衍生物的酯和酰胺鍵。 將EDTA添加到胰蛋白酶溶液中作為螯合劑，用于中和鈣離子和鎂離子以防止其抑制胰蛋白酶活性。 去除這些離子會增加酶活性。

絲氨酸蛋白酶抑制劑（包括DFP、TLCK、APMSF、AEBSEF和抑肽酶等）會抑制胰蛋白酶。

Preparation Note

本品為凍干粉，可以25mg/mL溶于Hank′s平衡鹽溶液。

對于需要EDTA的應(yīng)用，溶解胰蛋白酶應(yīng)該使用不含Ca2+ 或 Mg2+的緩沖鹽溶液.

Other Notes

一個BAEE單位以BAEE作為底物，在25°C、pH 7.6條件下每分鐘每毫升產(chǎn)生0.001的ΔA253 。一個BTEE單位=320個ATEE單位。反應(yīng)體積=3.2mL（1cm的光徑）。

胰蛋白酶是由含223個氨基酸殘基的單鏈多肽組成的，它通過切割胰蛋白酶原的Lys-1le肽鍵以去除N-末端六肽而獲得。 氨基酸序列通過6個二硫鍵交聯(lián)。 這是天然形式的胰蛋白酶——β-胰蛋白酶。 β-胰蛋白酶可以自溶，在Lys-Ser殘基處斷裂，產(chǎn)生α-胰蛋白酶。 胰蛋白酶是絲氨酸蛋白酶家族的成員。

Disclaimer

溶于1mM HCl的溶液分裝后可在-20℃穩(wěn)定保存1年。Ca2+ 的存在也會降低胰蛋白酶的自水解性，保持其在溶液中的穩(wěn)定性。 胰蛋白酶也將在2.0 M尿素、2.0 M鹽酸胍或0.1% (w/v) SDS中保持大部分活性。

?四、華雅思創(chuàng)現(xiàn)貨保障，冷鏈配送

華雅思創(chuàng)專注進口生物試劑、細胞培養(yǎng)耗材供應(yīng)，Merck-Sigma A6964-100ML Accutase? 溶液庫存充足，支持冷鏈干冰發(fā)貨，可提供產(chǎn)品相關(guān)資質(zhì)文件?？蒲袡C構(gòu)、生物企業(yè)可批量采購，避免試劑斷貨耽誤細胞傳代與樣本制備工作。

細胞解離試劑選型，細胞活性、組分純度、批次穩(wěn)定性是核心考量。A6964-100ML Merck-Sigma Accutase? 溶液適合對細胞保護要求高的實驗，華雅思創(chuàng)現(xiàn)貨供應(yīng)，是細胞實驗室采購的可靠選擇。