G418簡介

G418的結(jié)構(gòu)中包含雙堿基環(huán)醇和2-脫氧鏈霉胺，它們通過糖苷鍵與氨基糖連接。G418的結(jié)構(gòu)獨(dú)特性源于 C-6 位置的羥基功能而不是氨基功能。這種差異使其能與80S核糖體復(fù)合物特異性結(jié)合，與其他非特異性結(jié)合真核細(xì)胞核糖體的氨基糖苷類藥物相比，G418 抑制真核細(xì)胞蛋白合成的作用更強(qiáng)。而氨基糖苷類修飾酶，即氨基糖苷類磷酸轉(zhuǎn)移酶（APH），可共價(jià)修飾抗生素（如G418）的氨基或羥基功能，削弱藥物-核糖體的相互作用，從而妨礙G418發(fā)揮功能，即表現(xiàn)為耐藥的效果。

當(dāng)新霉素抗性基因被成功轉(zhuǎn)染進(jìn)真核細(xì)胞后，可獲得抗性產(chǎn)物氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶的高效表達(dá)，使細(xì)胞獲得抗性而能在含有G418的選擇性培養(yǎng)基中生長。因此G418作為一種有效的真核翻譯抑制劑，被廣泛用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染新霉素抗性基因（表達(dá)氨基糖苷類修飾酶）的真核細(xì)胞的選擇和維持。推薦常用的篩選濃度范圍為 100-800 μg/mL?？股氐挠行麧舛葧蚣?xì)胞類型、培養(yǎng)基、生長條件、細(xì)胞密度、細(xì)胞的代謝速率和所處的細(xì)胞周期而異。為了克服這些變量并確保成功，理想情況下，應(yīng)通過實(shí)驗(yàn)確定每個(gè)特定的培養(yǎng)系統(tǒng)的工作濃度，以及引入新變量時(shí)的工作濃度。工作濃度可以通過繪制劑量反應(yīng)曲線來確定。當(dāng)在新的細(xì)胞系統(tǒng)中使用G418硫酸鹽時(shí)，建議繪制全劑量曲線，并且在每次使用新批次的G418硫酸鹽時(shí)，重制劑量曲線。

作用機(jī)制

G418的結(jié)構(gòu)中含有雙堿基環(huán)醇和2-脫氧鏈霉胺，這些結(jié)構(gòu)通過糖苷鍵與氨基糖連接。G418的獨(dú)特性來源于其C-6位置的羥基功能，而非氨基功能。這種結(jié)構(gòu)上的差異使得G418能夠與80S核糖體復(fù)合物特異性結(jié)合，相較于其他氨基糖苷類藥物，G418對真核細(xì)胞蛋白質(zhì)合成的抑制作用更為顯著。

篩選應(yīng)用

G418常被用于篩選表達(dá)氨基糖苷類修飾酶的細(xì)胞株。這些修飾酶，如氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶（APH），能夠共價(jià)修飾G418的氨基或羥基功能，削弱藥物與核糖體的相互作用，從而產(chǎn)生耐藥效果。當(dāng)真核細(xì)胞成功轉(zhuǎn)染新霉素抗性基因后，它們能夠高效表達(dá)氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶，獲得在含有G418的選擇性培養(yǎng)基中生長的能力。

推薦使用濃度

G418作為真核翻譯抑制劑的推薦篩選濃度范圍為100-800 μg/mL。然而，有效的殺傷濃度會因細(xì)胞類型、培養(yǎng)基、生長條件等多種因素而異。因此，為了確保篩選的成功，建議通過實(shí)驗(yàn)確定每個(gè)特定培養(yǎng)系統(tǒng)的工作濃度。

康寧廠家介紹

康寧公司是全球領(lǐng)先的生命科學(xué)和材料科學(xué)創(chuàng)新者，其細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品組合包括一系列抗生素和抗真菌試劑產(chǎn)品。這些產(chǎn)品可以滿足從殺菌到抑菌的多種需求，為細(xì)胞培養(yǎng)提供適合的環(huán)境，也可用于微生物或哺乳動(dòng)物細(xì)胞的篩選性培養(yǎng)。康寧的產(chǎn)品以其高質(zhì)量和可靠性而聞名，是科研人員在實(shí)驗(yàn)室研究中不可或缺的工具。