對照樣品在免疫印跡結(jié)果的判定上起著非常重要的作用。對照樣品是使用抗體來檢測樣品中的蛋白。當(dāng)使用免疫印跡來決定某個(gè)樣品中蛋白表達(dá)的水平時(shí)，上對照樣是用來保證結(jié)果不是由于上樣問題或者蛋白轉(zhuǎn)印的錯(cuò)誤。當(dāng)使用上樣對照時(shí)，正確類型的對照首先需要選擇出來。

上對照樣品的好處

上對照樣品，有很多好處，通常來說關(guān)于質(zhì)量。沒有一個(gè)上樣對照，免疫印跡的結(jié)果不能發(fā)布因?yàn)椴荒茏銐虻淖C實(shí)。因?yàn)檫@樣，上對照樣對于那些想要發(fā)表的研究來說非常重要。當(dāng)有一個(gè)上樣對照的時(shí)候，常見的錯(cuò)誤比如轉(zhuǎn)印失敗會(huì)變得非常突出。這減少了花在那些不能使人信服的或不正確的結(jié)果上的時(shí)間。

進(jìn)一步講，類似于邊緣效應(yīng)的問題?—?當(dāng)?shù)鞍讖耐獠康挠镜老蛑行钠?—?可以排除通過使用上樣對照，優(yōu)化調(diào)整整個(gè)印跡過程，上樣對照可以用來進(jìn)一步減低不規(guī)則蛋白表達(dá)水平的影響。在任何情況下蛋白會(huì)被要么上樣或者轉(zhuǎn)印錯(cuò)誤所影響，上對照樣就顯得尤為重要.

常用的上樣對照

有幾種主流類型的上樣對照.?取決于免疫印跡本身，任何這些蛋白或者是理想的選擇.?如下是常用的上樣對照。

·?Actin. Actin是對于全細(xì)胞和細(xì)胞質(zhì)抽提的應(yīng)用來說是理想的選擇。有各種形式可供選擇, Actin是極其多用途的上樣對照。Actin不能用于骨骼肌肉樣品，因?yàn)樗羌∪饣顒?dòng)的主要組分。

·?GAPDH.?甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)是另外一個(gè)全細(xì)胞和細(xì)胞質(zhì)抽提上樣對照.?通過打斷葡萄糖和碳分子，GAPDH作為糖酵解催化劑.

·?Porin. Porin對于線粒體蛋白來說是一個(gè)理想的上樣對照. Porin是一個(gè)電壓依賴性的陰離子選擇通道蛋白,?在很多組織中都得到了發(fā)現(xiàn)。

·?Lamin B1.?主要適用于核蛋白膜，Lamin B1?理論上人為主要負(fù)責(zé)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞核一些元素的穩(wěn)定. Lamin B1不應(yīng)該作為上樣對照當(dāng)沒有核膜的時(shí)候。

·?TBP. TATA?結(jié)合蛋白?(TBP)是另外一個(gè)核蛋白的上樣對照.?它是一個(gè)轉(zhuǎn)錄結(jié)合蛋白, TBP?直接和RNA聚合酶II一起發(fā)揮作用在DNA定序中被發(fā)現(xiàn)。

除了有不同類型的上樣對照，而且上樣對照也有不同的產(chǎn)品形式，包括沒有偶聯(lián)或偶聯(lián)特定的標(biāo)記,?酶或者染料用于簡單的檢測.

使用上樣對照的缺點(diǎn)

由于涉及到許多準(zhǔn)確性的檢查，一個(gè)上樣對照會(huì)增加每次免疫印跡的成本和時(shí)間。不管這是否有價(jià)值這都取決于實(shí)驗(yàn)室的應(yīng)用以及他們的需求。因?yàn)樯蠘訉φ毡仨氁徺I，使用上樣對照的準(zhǔn)確成本取決于這個(gè)上樣對照哪里采購以及采購成本。進(jìn)一步講，針對某個(gè)特定的應(yīng)用使用錯(cuò)誤的上樣對照會(huì)導(dǎo)致一些準(zhǔn)確性和結(jié)果產(chǎn)生的相關(guān)問題。盡管如此，上樣對照是得到可靠檢測的要求。

那些不熟悉使用上樣對照的實(shí)驗(yàn)室或許需要首先了解他們實(shí)驗(yàn)室的需求，?—?以及對于他們來說合適的上樣對照。

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