NK 細胞添加劑升級方案（NK2.0）

ALyS505NK-AC 和ALyS505NK-EX 培養(yǎng)基進行 人類NK 細胞培養(yǎng)之標準操注意事項:
ALyS505NK(AC/EX)是專為細胞免疫治療研究而開發(fā)，不含有動物蛋白質(zhì)成
分，含有重組或醫(yī)療級人類蛋白質(zhì)的無血清細胞培養(yǎng)基，對人類 NK 細胞具有高增
殖性，適用于 NK 細胞的活化與擴增，是細胞免疫治療用最佳培養(yǎng)基。

【注意事項】
1、培養(yǎng)瓶
（1）由于部分患者 NK 細胞在誘導(dǎo)培養(yǎng)時候可能會有貼壁現(xiàn)象，為了避免此現(xiàn)象，
建議使用懸浮培養(yǎng)專用的 75cm2;225cm2細胞培養(yǎng)瓶（未經(jīng)過 TC 處理或者表面
低吸附的細胞培養(yǎng)瓶）。
2、Lymactin-NK 抗體
(1)Lymactin-NK(2.4mg/mL生理鹽水溶解)保存在-20攝氏度,使用前室溫溶解盡快
使用，同時低速短時間離心保證抗體充分吸取使用。
(2) Lymactin-NK抗體培養(yǎng)瓶包被，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶數(shù)分鐘，讓溶液在培養(yǎng)培養(yǎng)瓶
表面擴散。在室溫下孵育 1 小時，若不能及時使用為避免抗體活性下降，
Lymactin-NK抗體保存在 4℃冰箱（一周內(nèi)使用），直到使用前取出。
3、NK 細胞增殖誘導(dǎo)
（1）將血液采集至含有肝素鈉抗凝劑的試管，為避免影響細胞活性下降，請于 2
小時內(nèi)進行單個核細胞分離。室溫離心力 800xg 離心 20 分鐘。如果血液儲存超過
2 小時，將離心時間增至 30 分鐘。
(2)由于 IL-2 在 NK 細胞誘導(dǎo)分化及擴增作用非常重要，建議使用品質(zhì)穩(wěn)定的 IL-2
或進口品牌(推薦諾華品牌 Proleukin；22x106IU/vial 重組人類 IL-2)。
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（3）誘導(dǎo) NK 細胞培養(yǎng)細胞密度達到 1~1.5×106個/ml 和 5%-10%的滅活血漿才有
利于 NK 細胞的啟動。
(4)ALyS505NK-AC/EX 使用前，必須將培養(yǎng)基進行室溫平衡或者水浴箱溫育培
養(yǎng)基，避免低溫對 NK 細胞生長的影響。
（5） 嚴格執(zhí)行流程確保加入抗體、細胞因子、培養(yǎng)基的計量準確無誤，避免各種
成分誤差對 NK細胞生長的影響。
（6） 整個過程以靜置培養(yǎng)為主，操作過多過猛會影響 NK細胞表型。
4、擴大培養(yǎng)
開始活化培養(yǎng) 7 天后，培養(yǎng)培養(yǎng)瓶里的細胞懸浮液移入培養(yǎng)袋里，注意一下：
（ 1 ） 細胞轉(zhuǎn)移時，電動移液器輕輕吹打培養(yǎng)瓶壁，避免 NK細胞損傷。
（ 2 ） 有貼壁細胞黏貼瓶壁盡量用手掌輕輕拍打培養(yǎng)瓶，不易用力過猛，避免 NK
細胞損傷。
（ 3 ） 使用細胞袋建議培養(yǎng)液體積不超過 1000ml,才有利于 NK細胞的生長。
（ 4 ） 注意觀察細胞培養(yǎng)液顏色的變化和細胞計數(shù)，避免細胞培養(yǎng)過程細胞死亡。
（ 5 ） 擴增 NK細胞 IL-2在培養(yǎng)基的含量是指每次新加入的培養(yǎng)基內(nèi)的量，不是培
養(yǎng)體系總量含有濃度。