，主打一個抽象自嘲，“嗎嘍”“裝死者”“ATM-er”各種標(biāo)簽刷屏朋友圈，堪稱當(dāng)代打工人的精神嘴替！
作為實(shí)驗(yàn)室搬磚人，每天和BD采血管貼貼，突然靈光一閃——要是咱們實(shí)驗(yàn)室的“顯眼包”BD采血管去測SBTI，會測出什么炸裂人格？今天就來整活，帶大家解鎖BD采血管的隱藏“管”格，順便蹲一蹲和你同人格的那根“管”，華雅生物BD現(xiàn)貨速發(fā)，不用等貨，測完直接沖！
話不多說，前方高能！BD采血管SBTI人格對照表新鮮出爐，快對號入座
（嚴(yán)肅提醒：梗歸梗，產(chǎn)品信息絕對精準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)室人放心抄作業(yè)！）
BD采血管SBTI人格大賞（附貨號+用途，干貨拉滿）
1. 紅色頭蓋普通血清管（貨號：367812）
搞怪人格：嗎嘍打工人（Malo）——“人生是副本，我只是一只猴，默默干活不喊累”
純純“三無”好管子（無添加劑、無花活、無脾氣），主打一個無私奉獻(xiàn)，像極了實(shí)驗(yàn)室里默默搬磚的嗎嘍打工人
。日常負(fù)責(zé)常規(guī)生化血清檢驗(yàn)，不管是肝功能、腎功能還是電解質(zhì)檢測，它都能穩(wěn)穩(wěn)hold住，不搞特殊化，不耍小脾氣，只要你需要，它就安安靜靜待在那里，把血清乖乖分離出來，不添亂、不偷懶，妥妥的實(shí)驗(yàn)室“底層支柱”，性價比拉滿！
2. 金黃色頭蓋惰性分離膠促凝管（SST管，貨號：367955/367983）
搞怪人格：老好人調(diào)停者（Mediator）——“看透一切但不拆穿，中間隔離誰也不得罪”
實(shí)驗(yàn)室的“和平使者”非它莫屬！管內(nèi)含有惰性分離膠和促凝劑，堪稱“社交nb癥”天花板（不是）。采血后能快速促凝，離心后分離膠直接站在中間，把血清和血細(xì)胞分得明明白白，互不打擾、互不越界
，避免“鄰里矛盾”，讓后續(xù)檢驗(yàn)更精準(zhǔn)。不管是常規(guī)生化還是免疫檢測，它都能從容應(yīng)對，既照顧到血清的純度，又保護(hù)血細(xì)胞不被破壞，主打一個“一碗水端平”，誰見了都得說一句“絕絕子”！
3. 淺藍(lán)色頭蓋枸櫞酸鈉凝血試驗(yàn)管（血凝管，貨號：363093）
搞怪人格：強(qiáng)迫癥控制狂（Controller）——“精確到發(fā)絲，絕不允許一絲差錯”
重度強(qiáng)迫癥患者實(shí)錘！專門負(fù)責(zé)凝血四項(xiàng)檢測（凝血酶原時間、凝血酶時間等），管內(nèi)枸櫞酸鈉抗凝劑濃度精準(zhǔn)到0.109M，采血比例絲毫不容偏差，多一滴少一滴都能讓它“CPU燒了”
。它的底線就是：絕不允許血液提前凝固，絕不允許檢測結(jié)果有偏差，全程嚴(yán)格把控每一個細(xì)節(jié)，像極了上班時盯著報(bào)表、連標(biāo)點(diǎn)符號都要改三遍的控制狂，有它在，凝血檢測的準(zhǔn)確性直接拉滿！
4. 紫色頭蓋EDTA抗凝管（血常規(guī)管，貨號：367861）
搞怪人格：細(xì)節(jié)控藝術(shù)家（Artist）——“把每個細(xì)胞都寵成藝術(shù)品，吹毛求疵到極·致”
實(shí)驗(yàn)室的“顏值控+細(xì)節(jié)怪”，主打一個“精致到骨子里”！專門用于血常規(guī)檢測，管內(nèi)EDTA抗凝劑能牢牢保護(hù)細(xì)胞形態(tài)，不讓紅細(xì)胞、白細(xì)胞“變形走樣”，哪怕是最細(xì)小的細(xì)胞碎片，它都能細(xì)心呵護(hù)
。就像顯微鏡下的藝術(shù)家，對每一個細(xì)胞都吹毛求疵，力求呈現(xiàn)最真實(shí)、最完整的細(xì)胞狀態(tài)，醫(yī)生靠它判斷血常規(guī)指標(biāo)，簡直是“火眼金睛”的好幫手，細(xì)節(jié)控直接狂喜！
5. 綠色頭蓋肝素抗凝管（貨號：368480）
搞怪人格：急急國王（Speedster）——“風(fēng)風(fēng)火火，拒絕磨嘰，主打一個速戰(zhàn)速決”
實(shí)驗(yàn)室的“急性子顯眼包”，急脾氣星人實(shí)錘！專門用于急診生化、血漿測定，管內(nèi)肝素抗凝劑能快速抗凝，不需要漫長等待，采血后就能快速處理樣本，適配急診“與時間賽跑”的節(jié)奏
。最討厭磨磨蹭蹭，別人還在慢悠悠促凝，它已經(jīng)搞定血漿分離，堪稱“急診救星”，像極了上班趕地鐵、下班沖外賣的急急國王，主打一個“高效、快速、不拖更”！
6. 灰色頭蓋草酸鉀/氟化鈉血糖管（貨號：367933）
搞怪人格：時間凍結(jié)者（Time Freezer）——“管他滄海桑田，我的血糖必須原地封存”
自帶“時間靜止”buff的狠角色！專門用于血糖檢測，管內(nèi)草酸鉀抗凝+氟化鈉抑糖，雙重保障能讓血糖濃度在室溫下保持24小時穩(wěn)定，不降解、不變化，主打一個“歲月靜好，我自不變”
。就像能凍結(jié)時間的魔法師，不管外界溫度怎么變，不管樣本放多久，血糖數(shù)值始終精準(zhǔn)如一，再也不用擔(dān)心樣本放置太久導(dǎo)致檢測不準(zhǔn)，糖尿病患者的“福音管”，時間凍結(jié)者名不虛傳！
7. PAXgene全血RNA管（貨號：762165）
搞怪人格：碎片收藏家（Collector）——“易碎品守護(hù)者，科研界的拼圖高手”
溫柔又強(qiáng)大的“寶藏管子”，專門負(fù)責(zé)穩(wěn)定和保護(hù)RNA，主打一個“護(hù)犢子”！RNA有多脆弱，懂的都懂，稍微折騰就會降解，而它就像細(xì)心的碎片收藏家，能把脆弱的RNA保護(hù)得嚴(yán)嚴(yán)實(shí)實(shí)，不被破壞、不被降解
，為分子診斷、PCR檢測保駕護(hù)航。不管是科研實(shí)驗(yàn)還是臨床檢測，有它在，RNA樣本就能穩(wěn)穩(wěn)留存，堪稱科研界的“拼圖高手”，把破碎的RNA碎片拼成完整的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，誰能不愛？
重點(diǎn)來了！實(shí)驗(yàn)室人必看！
測完了BD采血管的SBTI人格，是不是已經(jīng)找到和你同頻的那根“管”？別著急沖，重點(diǎn)劃重點(diǎn)——
華雅生物，是BD品牌中國區(qū)正規(guī)代理商！文中所有型號BD采血管，我們均有現(xiàn)貨供應(yīng)，無需漫長等待，不用蹲貨、不用催單，下單即發(fā)，實(shí)驗(yàn)室補(bǔ)貨再也不用慌！
不管你需要“嗎嘍打工人”紅色血清管（367812），還是“急急國王”綠色肝素管（368480），亦或是“時間凍結(jié)者”灰色血糖管（367933），華雅生物一站式配齊，正品保障、價格給力！
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2.移除頂層的泡沫墊層，露出Gateway設(shè)備及其電源線。
3.輕輕從包裝中取出Gateway主機(jī)和充電器，同時請務(wù)必穩(wěn)固托住設(shè)備底部。
4.檢查所有組件是否有可見損壞或缺失。如發(fā)現(xiàn)任何問題，請先聯(lián)系技術(shù)支持后再繼續(xù)操作。
后動Gateway
1.請將Gateway設(shè)備放置在實(shí)驗(yàn)臺或生物安全柜內(nèi)(根據(jù)您的工作空間要求決定)。
2搬運(yùn)設(shè)備時，請單手握住拱形手提部位，另一只手托住基座進(jìn)行支撐。
3.將電源線插入標(biāo)準(zhǔn)電源插座。
4.將電源線另一端連接至Gateway側(cè)面的電源接口。
5.將電源開關(guān)撥至“ON”開后位置。
a.您將聽到設(shè)備開始加壓時內(nèi)部泵后動的聲音。
b.當(dāng)內(nèi)部壓力達(dá)到壓力表設(shè)定值時，啟動鈕將亮起指示燈。
操作說明
1.設(shè)定系統(tǒng)壓力
a.轉(zhuǎn)動位于Gateway設(shè)備側(cè)面的壓力調(diào)節(jié)旋鈕，即可設(shè)定所需壓力值。
b.請觀察設(shè)備正面的壓力表，確認(rèn)已達(dá)到設(shè)定壓力值;等待系統(tǒng)完成加壓過程。
2.準(zhǔn)備樣本收集區(qū)域
a.將開口的1.5毫升收集管放入管架中。
b.將管蓋插入管架側(cè)面的蓋槽中;注意避免觸碰管蓋內(nèi)部，以保持無菌狀態(tài)。
3.準(zhǔn)備Microbooster
a.請確認(rèn)Microbooster耗材的孔徑規(guī)格符合您的實(shí)驗(yàn)要求。
b.請小心撕開Microbooster耗材包裝:從頂部將紙質(zhì)與塑料封層分離揭開。
C.請確認(rèn)方向無誤后，將Microbooster耗材輕輕旋轉(zhuǎn)擰入基座上的鎖扣連接口。
d.請確保Microbooster耗材安裝牢固，但避免過度擰緊。
4.調(diào)整管架位置
a.向上拉動管架直至其完全升起，使收集管正好位于Microbooster輸出噴嘴的正下方。
5.開始實(shí)驗(yàn)
a.請確認(rèn)壓力表讀數(shù)仍處于預(yù)設(shè)壓力值，如有需要請調(diào)節(jié)旋鈕。
b.當(dāng)啟動鈕指示燈亮起時，請按住按鈕開始實(shí)驗(yàn)。
C.請持續(xù)按住啟動鈕，直至所有組分完全通過Microbooster耗材并轉(zhuǎn)移至1.5毫升收集管內(nèi)。
6 .結(jié)束流程
a.請輕輕向下按壓試管架，使其回歸初始位置。
b.請沿逆時針方向輕輕旋松Microbooster，將其從Gateway設(shè)備上分離。
c.請從蓋槽中取出管蓋，并將其牢固地蓋回收集管上。
d.請從試管架中取出1.5毫升收集管。
7.關(guān)閉電源
a.請將電源開關(guān)撥至”關(guān)閉”(OFF)位置以關(guān)閉設(shè)備。
市場上的胎牛血清種類繁多，魚龍混雜，使人難以分辨真?zhèn)渭捌焚|(zhì)。并且為節(jié)節(jié)攀高的胎牛血清價格頭疼不已？還在為時不時斷貨而苦惱？還在糾結(jié)用澳洲產(chǎn)血清還是新西蘭源血清？如今，大部分實(shí)驗(yàn)室都還在用胎牛血清或新生牛血清來培養(yǎng)細(xì)胞，但是隨著全球胎牛血清血源地減少以及胎牛血清價格的不斷上漲，以及來自動物保護(hù)組織的壓力，很多實(shí)驗(yàn)室尤其是干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室開始嘗試使用血清替代物來進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，這種趨勢從發(fā)達(dá)國家美國歐洲開始，他們的實(shí)驗(yàn)室很多都已經(jīng)進(jìn)行了很多年的血清替代物細(xì)胞培養(yǎng)。隨著亞洲尤其是中國科研經(jīng)費(fèi)的充足以及干細(xì)胞研究的興起，國內(nèi)的無血清細(xì)胞培養(yǎng)也蔚然成風(fēng)。
2005年首次報(bào)道人血小板裂解物(HPL)可以代替胎牛血清用于MSCs的大規(guī)模培養(yǎng)和制備，能滿足臨床應(yīng)用的需求。
隨后有一系列的文章證明HPL能起到FBS的功能，促進(jìn)MSCs的增殖擴(kuò)增。這種高效的細(xì)胞增殖刺激使MSCs能夠在11-16天的單個培養(yǎng)周期內(nèi)進(jìn)行大規(guī)模的臨床應(yīng)用，而不需要進(jìn)一步的傳代，同時保持基因組的穩(wěn)定性。
Ultroser G 血清替代品（Ultroser G serum substitute），是美國Pall公司專門針對生物治療、再生醫(yī)學(xué)、規(guī)?；竸游锛?xì)胞培養(yǎng)等過程中替代胎牛血清FBS研發(fā)而成，由Pall法國分公司生產(chǎn)，原裝進(jìn)口中國。
Ultroser G血清替代品具有25余年的應(yīng)用歷史，自上市以來，受到歐洲和美國眾多科研人員的一致認(rèn)可，在NCBI和ELSEVIER可搜索到近1000篇相關(guān)文獻(xiàn)。隨著全球胎牛血清價格的不斷上漲、干細(xì)胞研究的廣泛開展、以及國內(nèi)科研經(jīng)費(fèi)的增加，越來越多的實(shí)驗(yàn)室開始使用UltroserG 血清替代品進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。
2.美國上市公司頗爾，國際生命科學(xué)領(lǐng)導(dǎo)品牌，20多年的產(chǎn)品應(yīng)用歷史，得到美國和歐洲科學(xué)家的一致認(rèn)可；
3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果已經(jīng)得到證明，在主流文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫中可以搜索到上千篇發(fā)表的文獻(xiàn)；
4.生物活性是血清的5倍；
5.干粉狀包裝，易儲存；
6.組分的一致性，批次的穩(wěn)定性，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性提高；
7.恒定不變的生物活性；
8.更長的保質(zhì)期，從生產(chǎn)日期起4年；
9.兼容市場主流細(xì)胞培養(yǎng)基；
10.消除血清帶來的血紅蛋白，內(nèi)毒素，瘋牛病等潛在不穩(wěn)定因素影響；
PALL?15950-017血清替代品原瓶原裝進(jìn)口中國。PALL血清替代品專門針對疫苗生產(chǎn)、抗體制備、細(xì)胞治療、規(guī)模化動物細(xì)胞培養(yǎng)研制而成，具有活性高、批次一致的核心優(yōu)勢。
PALL?15950-017血清替代品血清替代品屬于半固定成分，相對于動物制品的胎牛血清，具有多方面的產(chǎn)品優(yōu)勢：
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實(shí)驗(yàn)方法:
- 使用CTS Dynabeads CD3/CD28(磁珠:細(xì)胞比例為3:1)在細(xì)胞培養(yǎng)袋中分離并激活來自健康供體的PBMC的T細(xì)胞，其中CTS OpTmizer T細(xì)胞擴(kuò)增SFM補(bǔ)充有CTS免疫細(xì)胞血清替代物，Gibco
L-谷氨酰胺和Gibco慶大霉素(不完全培養(yǎng)基)。 - 在移除磁珠后，在細(xì)胞培養(yǎng)板或者細(xì)胞培養(yǎng)袋中擴(kuò)增T細(xì)胞。
- 將分離的和活化的T細(xì)胞在完全培養(yǎng)基(不完全培養(yǎng)基加100U/mL IL-2)中擴(kuò)增7–10天；在刺激后第2，3或5天磁性移除CTS Dynabeads CD3/CD28。
- 用涂有重組人纖維蛋白試劑的微孔板中的編碼EGFP的γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)T細(xì)胞。
- 使用流式細(xì)胞分析軟件在細(xì)胞分析儀上進(jìn)行T細(xì)胞的流式細(xì)胞術(shù)分析。
- 使用Invitrogen Dynabeads mRNA DIRECT純化試劑盒分離來自T細(xì)胞的RNA，并使用Ion AmpliSeq試劑盒通過TCRβ測序?qū)ζ溥M(jìn)行分析。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
CTS Dynabeads CD3/CD28磁珠不需要上游T細(xì)胞選擇，因?yàn)樵摷夹g(shù)基于CD3和CD28共表達(dá)同時分離和激活初始和早期記憶T細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)分析顯示CD3+ CD28+ T細(xì)胞被分離，恢復(fù)率高(>90%)(圖2)。在激活后第3天，細(xì)胞被均勻刺激(>95% CD25+)并具有高純度(>95% CD3+)(圖3)。
（CTS Dynabeads CD3/CD28優(yōu)先分離CD3+ CD28+ 細(xì)胞。將PBMC與CTS Dynabeads CD3/CD28以3:1磁珠:細(xì)胞的比例孵育30分鐘，并分析陰性(非分離)級分并用于計(jì)算分離效率。A代表性細(xì)胞圖，證明CD3+ CD28+ T細(xì)胞分離的效率。B恢復(fù)實(shí)驗(yàn)總結(jié)(n = 9)。）
（用CTS Dynabeads CD3/CD28分離的T細(xì)胞被均勻刺激且具有高純度。(A，B)在分析活化標(biāo)記物之前，將分離的T細(xì)胞擴(kuò)增3天。(C，D)在第0天(起始材料)和激活后第3天和第10天分析T細(xì)胞純度。）
（T細(xì)胞擴(kuò)增后克隆多樣性增加。用CTS Dynabeads CD3/CD28分離并活化T細(xì)胞。(A)在第0，3和10天，收獲樣品用于TCRβ測序。(B)在一個實(shí)驗(yàn)中，在激活后第3天也用γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)T細(xì)胞。）
實(shí)驗(yàn)結(jié)論
- CTS Dynabeads CD3/CD28分離CD3+ CD28+ T細(xì)胞，效率高，純度高。
- 分離和活化的CD4+和CD8+ T細(xì)胞在10天內(nèi)擴(kuò)增100至800倍，同時保留年輕表型(CD45RA+/- CD127+/- CD62L+ PD-1-)。
- 基于TCRβ測序，擴(kuò)增的T細(xì)胞具有增加的克隆多樣性。
- 第2天去除磁珠提高了γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。
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]]>原理：對分離的單個細(xì)胞的微量全基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增，獲得高覆蓋率的完整的基因組后進(jìn)行高通量測序，廣泛應(yīng)用于癌癥研究、胚胎發(fā)育、輔助生殖、細(xì)胞分化、免疫機(jī)制、微生物等方向的研究。
獲得高覆蓋度高保真性的全基因組擴(kuò)增產(chǎn)物是準(zhǔn)確全面的測序結(jié)果的保障。為了保證基因組高覆蓋度無偏好性的擴(kuò)增，在單細(xì)胞測序技術(shù)誕生的近二十年時間里，全基因組擴(kuò)增技術(shù)經(jīng)歷了幾次重大的變革。
WGA主要有三種方式：DOP-PCR，MDA，MALBAC。
下面小編就來為大家介紹一下WGA技術(shù)的演變歷程，以及怎樣根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇相應(yīng)的擴(kuò)增方式。
DOP-PCR (Degenerate Oligonucleotide–Primed Polymerase Chain Reaction)
技術(shù)原理：簡并寡核苷酸引物PCR，引物的3′?含6bp的隨機(jī)序列，可以隨機(jī)的和基因組DNA結(jié)合，從而實(shí)現(xiàn)對全基因組的擴(kuò)增。
應(yīng)用范圍：因?yàn)镻CR的指數(shù)擴(kuò)增特性，放大了基因組上不同序列之間的差異，因而導(dǎo)致擴(kuò)增出的基因組覆蓋度較低。盡管如此，在1M bin size的水平上，DOP-PCR適合對染色體的CNV進(jìn)行定量。
商品化試劑盒：Sigma-Aldrich, GenomePlex Single Cell Whole Genome Amplification Kit。
? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? MDA (Multiple Displacement Amplification)
技術(shù)原理：2001年由Laskin團(tuán)隊(duì)發(fā)明，使用隨機(jī)的六聚體引物和φ29DNA聚合酶進(jìn)行反應(yīng)，該聚合酶具有很強(qiáng)的鏈置換特性，能夠在等溫的條件下，擴(kuò)增產(chǎn)生50~100kb的核酸片段。同時由于其3’-5’核酸外切酶活性和校對活性，φ29 DNA聚合酶具有很高的復(fù)制保真性。應(yīng)用范圍：MDA法比DOP-PCR擁有更高的基因組覆蓋度，φ29 DNA聚合酶的高效率及高保真性，使得MDA法在對SNV的分析，以及構(gòu)建大片段文庫上有著顯著優(yōu)勢。但是，和DOP-PCR相同，MDA法依然是指數(shù)擴(kuò)增，因此依然存在PCR反應(yīng)的序列偏好性，然而，和DOP-PCR不同的是，這種偏好性并不能重復(fù)，因此MDA法不適合進(jìn)行CNV的分析。
商品化試劑盒：Qiagen,?REPLI-g?Single?Cell?Kit。?
? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? MALBAC (Multiple Annealing and Looping–Based Amplification Cycles)
技術(shù)原理：2012年由謝曉亮團(tuán)隊(duì)發(fā)明，擬線性的擴(kuò)增過程降低了指數(shù)擴(kuò)增的序列偏好性。擴(kuò)增引物的5’含有27bp的共同序列，3’是8bp的隨機(jī)序列，可以和模板在15~20℃的低溫下結(jié)合，經(jīng)過8~12個循環(huán)的擬線性擴(kuò)增后，再對這些環(huán)狀的擴(kuò)增子進(jìn)行指數(shù)擴(kuò)增。應(yīng)用范圍：MALBAC法的優(yōu)勢在于，雖然它依然存在一定的序列偏好性，但和MDA不同，MALBAC的這種偏好性在不同的細(xì)胞之間是可重復(fù)的，因此可以通過對參考細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)化后，進(jìn)行CNV的分析；另外，由于其擴(kuò)增的均一性，MALBAC法擴(kuò)增的等位基因敲除率更低。MALBAC的弱點(diǎn)在于，它使用的聚合酶保真性不如φ29，因此MALBAC在檢測SNV時將會出現(xiàn)更多的假陽性；另外，由于它可重復(fù)性的序列偏好性，基因組上低擴(kuò)增的區(qū)域有時會在擴(kuò)增過程中丟失。
商品化試劑盒：Yikon, Single Cell Whole Genome Amplification Kit; Rubicon, PicoPLEX WGA Kit。
由上述的分析可見，MDA和MALBAC各有優(yōu)劣，實(shí)際上在不同的文獻(xiàn)中，研究者也會根據(jù)研究目的的不同，采取不同的方式對基因組進(jìn)行擴(kuò)增，以滿足研究的需要。
PicoPLEX??WGA Kit：用于單細(xì)胞文庫構(gòu)建的全基因組擴(kuò)增解決方案
PicoPLEX??DNA-seq Kit：單細(xì)胞 DNA 文庫制備技術(shù)，適用于 Illumina 所有 NGS 測序平臺
ThurPLEX??DNA-seq Kit：更高的通量, 更好的性能, 用于所有 Illumina 的 NGS 平臺
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| Rubicon | R400407 | ThruPLEX DNA-seq 96D Kit | 96 |
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全球和中國干細(xì)胞總體趨勢對比分析
隨著申請量的上升，授權(quán)量也 相應(yīng)上升，但授權(quán)率近年來沒有太大波動，基本維持 在30%—40%之間細(xì)胞技術(shù)越來越受到重視，目前已進(jìn)入快速生長期。此外，中國干細(xì)胞的授權(quán)率基本維持在40%—50%之間，高于全球10個百分點(diǎn)。
全球（左）和中國（右）專利技術(shù)
從圖中全球干細(xì)胞技術(shù)生命周期分析中可以看出，干細(xì)胞技術(shù)一直處于線性上升趨勢，平均斜率為2.7左右，說明干細(xì)胞技術(shù)現(xiàn)在仍處于發(fā)展階段，2001年之前的20年生長緩慢， 2001年之后的20年快速增長，這與全球干細(xì)胞總體趨勢一致。
全球干細(xì)胞申請量位居前二十位的國家/地區(qū)，對干細(xì)胞的地域分布情況進(jìn)行分析。
各國家/地區(qū)的申請來看，美國申請5 418件居首位，研究機(jī)構(gòu)及私人企業(yè)的重點(diǎn)研發(fā)，使其成為全球干細(xì)胞的領(lǐng)導(dǎo)者；中國和世界知識產(chǎn)權(quán)組織緊隨其后，分別為4 843件和4 094件，中國政府近幾年加大了干細(xì)胞的研究投入，并將其納入“十三五”國家規(guī)劃和“健康中國2030”綱要；歐洲專利局、日本和韓國位列第三、第四和第五，日本的京都大學(xué)和韓國的首爾國立大學(xué)在干細(xì)胞技術(shù)研究上投入較大，并取得了豐碩的成果。
全球和中國干細(xì)胞主要競爭者
從全球近十年獲得干細(xì)胞發(fā)明專利授權(quán)的機(jī)構(gòu)中選取前十位，如圖。從機(jī)構(gòu)性質(zhì)上看，7家為科研院校，3家為上市公司；從國家分布上看，美國占7名，日本、韓國、中國各占1名?？傮w來說，各機(jī)構(gòu)的授權(quán)量都呈上升趨勢。
總體來看，近十年全球和中國都重點(diǎn)關(guān)注間充質(zhì)干細(xì)胞和多能干細(xì)胞，包括臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞等，不同點(diǎn)是全球還關(guān)注造血干細(xì)胞和干細(xì)胞制藥，中國關(guān)注神經(jīng)干細(xì)胞和腫瘤干細(xì)胞等。對比前五年（2008—2012年）與后五年（2013—2017年），全球關(guān)于核酸下降，生長因子和造血干細(xì)胞上升，中國關(guān)于多能干細(xì)胞和干細(xì)胞營養(yǎng)液下降，生長因子上升。
中國關(guān)注神經(jīng)干細(xì)胞和腫瘤干細(xì)胞，且近五年的研究重點(diǎn)增加了抗腫瘤藥和治療傷口、潰瘍、燒傷、疤痕、疙瘩等藥物，說明中國干細(xì)胞研究方向逐漸偏向抗腫瘤和創(chuàng)傷整形等方面。全球?qū)υ煅杉?xì)胞和干細(xì)胞制藥研究較多，但中國在此方面相對較少，今后可加大該方面的研究。
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近日，某醫(yī)院有一老年病例，因吃炸醬面時不小心吸入了一粒肉醬后幾天開始發(fā)燒，咳嗽，呼吸困難入院，導(dǎo)致吸入性肺炎！后來經(jīng)過檢測治療發(fā)現(xiàn)為金黃色葡萄球菌肺炎，其痰培養(yǎng)示金黃色葡萄球菌證實(shí)吸入性金黃色葡萄球菌肺炎診斷?？磥硎腔颊咴谶M(jìn)食時吸入了一粒帶有金黃色葡萄球菌的肉醬，而引發(fā)的肺炎！
什么一粒肉醬竟會導(dǎo)致這么嚴(yán)重的后果？什么是金黃色葡萄球菌？
金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus ) 是人類的一種重要病原菌，隸屬于葡萄球菌屬(Staphylococcus)，有”嗜肉菌”的別稱，是革蘭氏陽性菌的代表，可引起許多嚴(yán)重感染。而對于金黃色葡萄球菌在速凍食品中的存在量，衛(wèi)生部于2011年11月24日公布食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)《速凍面米制品》，允許金葡菌限量存在。
金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一種具有較強(qiáng)攻擊性的常見人類病原菌，隸屬于葡萄球菌屬，可引起多種醫(yī)院感染和社區(qū)感染性疾病，輕者引起化膿性皮膚感染，嚴(yán)重時甚至導(dǎo)致各種危及生命的并發(fā)癥，如菌血癥和心內(nèi)膜炎。金黃色葡萄球菌在環(huán)境中分布廣泛，對外界不利環(huán)境如干燥、低溫等有較強(qiáng)的抵抗能力，極易通過各種途徑污染食品，會引發(fā)金黃色葡萄球菌食物中毒（S.aureus food poisoning，SFP），對食品安全和人類健康造成重大威脅。當(dāng)金黃色葡萄球菌污染食品后，會在適宜的環(huán)境條件下大量繁殖，與此同時分泌各種毒素或毒力因子，如金黃色葡萄球菌腸毒素（Staphylococcal enterotoxins，SE），大大增加了其侵襲性和致病力。
根據(jù)美國疾病預(yù)防控制中心的研究報(bào)道，每年在美國由金黃色葡萄球菌導(dǎo)致的食物中毒約有24萬人次，其中1000多人需要住院治療并約10人因此死亡，由該菌引起的食物中毒占整個細(xì)菌性食物中毒的33%；在加拿大，這個比例高達(dá)45%同。我國每年也會發(fā)生多起該類食品安全事件，給醫(yī)療衛(wèi)生造成巨大壓力。
金黃色葡萄球菌感染危害
當(dāng)身體被金黃色葡萄球菌感染的時候，體內(nèi)的白細(xì)胞會有所下降，從而導(dǎo)致機(jī)體的抵抗力下降，增加患病的風(fēng)險(xiǎn)。
當(dāng)天氣炎熱的時候，食物易發(fā)生變質(zhì)，產(chǎn)生大量的金黃色葡萄球菌，從而引起金黃色葡萄球菌感染癥狀，導(dǎo)致出現(xiàn)食物中毒的現(xiàn)象，引起機(jī)體產(chǎn)生一些惡心、嘔吐、頭暈等食物中毒反應(yīng)，嚴(yán)重的可能會出現(xiàn)暈厥的現(xiàn)象。
金黃色葡萄球菌對皮膚也會造成傷害，引起皮膚出現(xiàn)潰爛化膿的現(xiàn)象，如果傷口處被金黃色葡萄球菌感染，會使傷口擴(kuò)散，加重病情，延長傷口的愈合時間，身體出現(xiàn)嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)，引起發(fā)熱，惡心等現(xiàn)象。如果血液中含有金黃色葡萄球菌，經(jīng)過大腦后，嚴(yán)重會引起腦膜炎，輕者出現(xiàn)頭痛、發(fā)熱、惡心嘔吐等不適癥狀，重者還會出現(xiàn)休克的現(xiàn)象，需要立即搶救才可以。
另外，金黃色葡萄球菌感染后還可能會出現(xiàn)其它方面的疾病，比如引起腸炎、肺炎、心內(nèi)膜炎等，還可能會引起中毒性的休克、敗血癥等嚴(yán)重后果，因此，大家日常需要注意做好個人的衛(wèi)生工作，勤加鍛煉，提高身體的免疫力和抵抗能力。
相關(guān)事件
北京市工商局2011年10月19日查出思念牌的三鮮水餃含有金黃色葡萄球菌。
新快報(bào)2011年11月4日報(bào)道，廣州市工商局公布2011年第三季度三類食品質(zhì)量檢驗(yàn)結(jié)果，“三全”以及“海霸王”的三款速凍食品也都被驗(yàn)出含有金黃色葡萄球菌，分別是“三全灌湯水餃(豬肉玉米蔬菜)”、“三全灌湯水餃(三鮮)”以及“海霸王經(jīng)典包心魚丸”。
2012年1月，媒體報(bào)道，爺爺因親吻三代單傳的孫子致其感染金黃色葡萄球菌而得敗血癥，最終不治死亡。
控制方法
金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測主要有動物試驗(yàn)、血清學(xué)試驗(yàn)、免疫熒光試驗(yàn)及酶聯(lián)免疫吸附等方法。
防止帶菌人群對各種食物的污染，需要定期對生產(chǎn)加工人員進(jìn)行健康檢查，患局部化膿性感染（如疥瘡、手指化膿等）、上呼吸道感染（如鼻竇炎、化膿性肺炎、口腔疾病等）的人員要暫時停止其工作或調(diào)換崗位。
防止金黃色葡萄球菌對奶及其制品的污染，牛奶廠要定期檢查奶牛的乳房，不能擠用患化膿性乳腺炎乳牛的牛奶；奶擠出后，要迅速冷至-10℃以下，以防毒素生成、細(xì)菌繁殖。奶制品要以消毒牛奶為原料，注意低溫保存。對肉制品加工廠，患局部化膿感染的禽、畜尸體應(yīng)除去病變部位，經(jīng)高溫或其他適當(dāng)方式處理后進(jìn)行加工生產(chǎn)。
防止金黃色葡萄球菌腸毒素的生成，應(yīng)在低溫和通風(fēng)良好的條件下貯藏食物，以防腸毒素形成；在氣溫高的春夏季，食物置冷藏或通風(fēng)陰涼地方也不應(yīng)超過6h，并且食用前要徹底加熱。
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2019年底突如其來的新型冠狀病毒，讓我們再次認(rèn)識到了廣泛分布且種類繁多的病原微生物對人類的威脅。面對一場突如其來的疫情，既要采用科學(xué)的手段快速發(fā)現(xiàn)并認(rèn)識病原微生物，同時也要基于科學(xué)的認(rèn)識制定可行的臨床檢測和治療方案。新興的高通量基因測序技術(shù)通過直接對病毒基因組進(jìn)行全面分析，對于2019-nCoV的首先確認(rèn)、動態(tài)分析、進(jìn)化來源以及致病機(jī)制、傳播途徑研究等具備了無可比擬的優(yōu)勢。
作為分子生物學(xué)領(lǐng)域的行業(yè)領(lǐng)導(dǎo)者，QIAGEN旗下多款經(jīng)典病毒核酸純化試劑盒就以其回收率高、核酸純度高、多樣本兼容性的優(yōu)勢在2019-nCoV實(shí)驗(yàn)檢測環(huán)節(jié)中 做好準(zhǔn)備。同時QIAGEN提供了基于不同技術(shù)和方法的檢測方案，包括高通量測序技術(shù)方案。
除了新型冠狀病毒外，近年來造成人類感染的病原微生物也日益復(fù)雜，同時抗菌藥物濫用與細(xì)菌耐藥已成為全球關(guān)注的焦點(diǎn)。如今，高通量測序已經(jīng)迅速成為臨床實(shí)驗(yàn)室的重要檢測平臺，延展并提高了經(jīng)典微生物方法的檢測能力，
病毒核酸全轉(zhuǎn)錄組擴(kuò)增
實(shí)際的檢測過程中可能拿到的并非都是最佳樣本，如來自上呼吸道的咽拭子就因其自身病毒含量低而極易造成檢測假陰性。面對這樣的現(xiàn)實(shí)困境，我們在提高核酸產(chǎn)量、質(zhì)量的同時，也可以借助 “全轉(zhuǎn)錄組擴(kuò)增技（WTA）”技術(shù)對核酸進(jìn)行均等的放大，解決樣本量不足的難題。
基于QIAGEN充分優(yōu)化改良的 “多重置換擴(kuò)增（MDA）”技術(shù)，REPLI-g WTA Single Cell能夠針對單個細(xì)胞或pg級純化RNA進(jìn)行快速的全轉(zhuǎn)錄組擴(kuò)增。區(qū)別于傳統(tǒng)PCR類擴(kuò)增方法，REPLI-g可在等溫條件下進(jìn)行均等、高保真的高靈敏度擴(kuò)增，雙鏈cDNA產(chǎn)物非常適用于下游進(jìn)行高通量測序（二代或三代測序）、PCR等方法檢測，也多次被運(yùn)用于類似疫情的檢測方案中，如在2014年西非埃博拉病毒以及2016年中國南方的寨卡病毒疫情方案中，來自中國疾控中心、廣東省疾控中心等單位的研究人員就已將REPLI-g應(yīng)用在對抗疫情的實(shí)戰(zhàn)中。
人源等宿主rRNA去除
疫情檢測所采用的樣本絕大多數(shù)來自呼吸道、血液等，純化后的核酸產(chǎn)物中還存在著大量的人源RNA，占用大量數(shù)據(jù)的同時還會對結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生潛在影響。通過對測序的結(jié)果進(jìn)行分析，我們可看到人源rRNA序列占比極高，因此我們可以通過去除人源rRNA等手段來部分解決這一問題。此時，又到了QIAseq FastSelect展現(xiàn)其真正實(shí)力的時候了！
借助獨(dú)特的“黑科技”，僅需通過簡單的1步加樣以及一段程序性降溫孵育，無需任何純化步驟，便能在14分鐘內(nèi)完成樣品中人源或其他哺乳動物來源rRNA的高效去除。這一過程可與REPLI-g WTA Single Cell Kit以及幾乎所有其他的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、RNA建庫試劑盒相兼容，在避免因多步純化而造成病毒核酸損失的同時，還可極為快速地完成rRNA去除這一限速步驟。此外，如果在糞便、肛拭子等樣本中存在較多的細(xì)菌組分，我們也同樣可以利用QIAseq FastSelect 5S/16S/23S Kit結(jié)合QIAseq FastSelect HMR Kit在一步流程中同時完成全部細(xì)菌和宿主rRNA的去除，十分便捷。
產(chǎn)品名稱 ?????????貨號
QIAseq FastSelect -rRNA & -Globin HMR Kit???334386
NGS文庫構(gòu)建
在完成rRNA去除并對RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)（含二鏈合成）后，一款高效的建庫試劑盒是完成cDNA樣品文庫構(gòu)建的測序前關(guān)鍵步驟。KAPA?KK8514 DNA HyperPlus文庫構(gòu)建試劑盒
貨號：KK8514，整合了DNA酶切片段化及文庫構(gòu)建步驟，所有反應(yīng)均在一管中完成。酶切片段化可以降低DNA末端損傷，尤其對于FFPE DNA更是如此。
貨號 產(chǎn)品名稱 規(guī)格
KK8514 KAPA DNA HyperPlus?文庫構(gòu)建試劑盒，含擴(kuò)增 96?次
KK8512 KAPA DNA HyperPlus?文庫構(gòu)建試劑盒，含擴(kuò)增 24次
KK8513 KAPA DNA HyperPlus?文庫構(gòu)建試劑盒，PCR-Free 24?次
KK8515 KAPA DNA HyperPlus?文庫構(gòu)建試劑盒，PCR-Free 96?次
過去幾周來自中國疾控等單位的科學(xué)家在其研究中也分別采用了QIAGEN樣本制備（QIAamp Viral RNA Mini Kit，貨號：52904）等解決方案進(jìn)行了冠狀病毒的測序和基因組分析并相繼發(fā)表在國際頂尖雜志上。
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CIK細(xì)胞中的效應(yīng)細(xì)胞CD3+CD56+細(xì)胞在正常人外周血中極其罕見，僅1%～5%，在體外經(jīng)多因子培養(yǎng)28～30天，CD3+CD56+細(xì)胞迅速增多，較培養(yǎng)前升幅可達(dá)1000倍以上。實(shí)驗(yàn)證明，擴(kuò)增出的CD3+CD56+細(xì)胞來源于外周血中的CD3+CD56-T細(xì)胞和CD4-CD8+T細(xì)胞，而非CD3-CD56+NK細(xì)胞。比較CD3+CD56+CIK細(xì)胞中表達(dá)CD8+和CD8-的兩群細(xì)胞其殺瘤活性沒有顯著性差異，提示CIK細(xì)胞的細(xì)胞毒性與CD3CD56表達(dá)成相關(guān)趨勢，而與CD8的表達(dá)未表現(xiàn)出相關(guān)性。
CIK細(xì)胞治療殺傷原理
??? CIK細(xì)胞能夠通過三種途徑殺滅腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞：
CIK細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞的直接殺傷：CIK細(xì)胞可以通過不同的機(jī)制識別腫瘤細(xì)胞，釋放顆粒酶/穿孔素等毒性顆粒，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞裂解。
CIK細(xì)胞釋放的大量炎性細(xì)胞因子具有抑瘤殺瘤活性：體外培養(yǎng)的CIK細(xì)胞可以分泌多種細(xì)胞因子，如IFN-γ、TNF-α、IL-2等，不僅對腫瘤細(xì)胞有直接抑制作用，還可通過調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)反應(yīng)間接殺傷腫瘤細(xì)胞。
CIK細(xì)胞能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡：CIK細(xì)胞在培養(yǎng)過程中表達(dá)FasL（Ⅱ型跨膜糖蛋白）通過與腫瘤細(xì)胞膜表達(dá)的Fas（Ⅰ型跨膜糖蛋白）結(jié)合，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。
CIK細(xì)胞治療殺瘤特點(diǎn)
1.?增殖速度快?
CIK細(xì)胞在培養(yǎng)過程中加入多種細(xì)胞因子后，細(xì)胞增殖速度迅速加快，在培養(yǎng)第22天增殖曲線達(dá)頂峰，其中CD3+CD56+細(xì)胞不僅數(shù)量增加1000倍以上，且所占百分比也大幅上升，培養(yǎng)至28～30天時達(dá)平臺期，細(xì)胞毒活性亦達(dá)峰值。
2.殺瘤活性高?
CIK細(xì)胞是以CD3+CD56+T細(xì)胞為主的異質(zhì)細(xì)胞群，大量體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)CIK細(xì)胞較以NK細(xì)胞為主的LAK細(xì)胞具備更強(qiáng)大的殺瘤活性，而且其體內(nèi)殺瘤細(xì)胞毒性的維持不必依賴大劑量外源性IL-2的持續(xù)給予。體外實(shí)驗(yàn)表明CIK細(xì)胞殺傷效率更高。
3.殺瘤譜廣?
CIK細(xì)胞因沒有T淋巴細(xì)胞殺傷時的MHC限制性，故對于多種腫瘤細(xì)胞系（包括K562、Hela、HL60、OCRF-CEM等）和新鮮腫瘤組織均表現(xiàn)出強(qiáng)大的殺傷活性。
4.?對多重耐藥腫瘤細(xì)胞同樣敏感
CIK細(xì)胞對化療藥物敏感的親本細(xì)胞和不敏感的轉(zhuǎn)化細(xì)胞均具有強(qiáng)大的殺傷活性，兩者比較無差別。
5.?殺瘤活性不受CsA、FK506等免疫抑制劑的影響
Mehta觀察到免疫抑制劑CsA和FK506雖然可以抑制抗CD3單抗介導(dǎo)的CIK細(xì)胞脫顆粒過程，卻不影響靶細(xì)胞誘導(dǎo)的CIK細(xì)胞脫顆粒，并且CIK細(xì)胞對靶細(xì)胞的殺傷活性不會因此降低
6.?對正常骨髓造血前體細(xì)胞毒性很小
實(shí)驗(yàn)證實(shí)CIK細(xì)胞對正常髓系克隆生成幾乎沒有影響。
7.?能抵抗腫瘤細(xì)胞引發(fā)的效應(yīng)細(xì)胞Fas-FasL凋亡
CIK細(xì)胞治療適應(yīng)癥
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CIK細(xì)胞治療屬于過繼細(xì)胞免疫療法，由于CIK細(xì)胞溶瘤作用是非MHC限制性的，即不受腫瘤組織類型的限制，因此對任何一種腫瘤均有殺傷作用，但對高抗原表達(dá)的癌癥療效最好，如：髓性白血病、黑色素瘤、腎細(xì)胞癌、轉(zhuǎn)移性腎癌、非何杰金氏淋巴瘤等。其它癌癥如肺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、肝癌、胃癌、大腸癌等，CIK細(xì)胞治療亦有較好的療效。CIK細(xì)胞治療適用于任何一期的癌癥患者，但對早期腫瘤患者或經(jīng)過手術(shù)及放化療后腫瘤負(fù)荷較小的患者效果好。它對于手術(shù)、放化療或造血干細(xì)胞移植后患者體內(nèi)微小殘留病灶的清除，防止癌細(xì)胞擴(kuò)散和復(fù)發(fā)，提高患者自身免疫力，減少毒性反應(yīng)等方面具有重要作用。某些不適合手術(shù)、不能耐受放化療的中晚期腫瘤患者，CIK細(xì)胞治療可以提高其生活質(zhì)量，延長帶瘤生存時間。
CIK細(xì)胞治療有效期
CIK細(xì)胞通過直接殺傷、分泌多種細(xì)胞因子等直接抑制腫瘤細(xì)胞生長，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡等途徑起到治療作用。大多數(shù)執(zhí)行殺傷功能的細(xì)胞在回輸后立即執(zhí)行其功能，半衰期約2周至一個月?；剌?shù)募?xì)胞中包括一部分記憶細(xì)胞，可存活幾年至幾十年，當(dāng)遇到相應(yīng)刺激后，迅速在體內(nèi)活化，殺傷靶細(xì)胞。所以CIK細(xì)胞治療的療程間隔原則上為一個月，建議首先間隔一個月連續(xù)做三個療程，以后每半年做一個療程。
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??? 自然殺傷細(xì)胞（NK cell, Natural killer cell）是一種細(xì)胞質(zhì)中具有大顆粒的細(xì)?胞，也稱NK細(xì)胞，由骨髓細(xì)胞發(fā)育而成。因?yàn)槠浞菍Ｒ恍缘募?xì)胞毒殺作用而被命名。NK細(xì)胞主要分布于外周血中，占外周血單核細(xì)胞（PBMC）的5%～10%，淋巴結(jié)和骨髓中也存在NK細(xì)胞，水平較外周血低，但它可以消滅許多種病源體及多種腫瘤細(xì)胞。自然殺傷細(xì)胞會直接和陌生細(xì)胞接觸，并以細(xì)胞膜?破裂之方式殺死此細(xì)胞，可利用分泌穿孔素及腫瘤壞死因子，摧毀目標(biāo)細(xì)胞。目前研究認(rèn)為NK細(xì)胞特異性表達(dá)CD56，而缺乏T細(xì)胞抗原CD3。一般認(rèn)為在PBMC中分選到CD3- / CD56+的細(xì)胞即為NK細(xì)胞。
??? NK細(xì)胞屬于粒狀淋巴細(xì)胞，是先天性免疫系統(tǒng)的重要組成部分，也是機(jī)體抗御感染和防止細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的重要免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞。它對靶細(xì)胞殺傷時既不需特異性抗體參加，也不需抗原預(yù)先致敏。卻能立即發(fā)揮非特異性殺傷靶細(xì)胞的作用，尤其是對多種腫瘤細(xì)胞有迅速殺傷和溶解作用。因此，NK細(xì)胞對癌癥的監(jiān)視作用和抵抗功能已越來越受到重視。
NK細(xì)胞的活化
??? NK細(xì)胞可通過多種途徑被活化，包括細(xì)胞膜表面的CD2、CD3分子和多種細(xì)胞因子。
????1.?通過CD3分子的ζ鏈
??? NK細(xì)胞不表達(dá)TCR/CD3復(fù)合物，但部分NK細(xì)胞表達(dá)CD3ζ鏈，當(dāng)用CD16抗體刺激NK細(xì)胞活化時，ζ鏈發(fā)生酪氨酸磷酸化，引起胞漿內(nèi)Ca2+濃度升高，IP3水平增加，促進(jìn)細(xì)胞因子合成和ADCC作用。
????2.?通過CD2分子
??? CD2與CD58相互作用或用CD2 McAb刺激可活化NK細(xì)胞，CD3 ζ鏈發(fā)生酪氨酸磷酸化。
????3.?自然殺傷細(xì)胞刺激因子
??? 自然殺傷細(xì)胞刺激因子（natural killer cell stimulatory factor, NKSF)對NK細(xì)胞有刺激作用。IL-2、IL-12、IFN-α、TNF-α以及白細(xì)胞調(diào)節(jié)素(leukoregulin, LR)?對NK細(xì)胞的活化和分化有正調(diào)節(jié)作用，?體外培養(yǎng)時加入上述細(xì)胞因子可明顯提高NK的殺傷活性。
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NK細(xì)胞的功能
??? 1. 自然殺傷活性，NK細(xì)胞的殺傷活性無MHC限制，不依賴抗體，可以直接通過分泌釋放穿孔素、顆粒酶、NK細(xì)胞毒性因子、TNF-α和TNF-β等對病毒感染的細(xì)胞、白血病細(xì)胞以及其他腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒活性，從而殺傷或者裂解靶細(xì)胞；
2. 抗病毒感染，NK可選擇性地殺傷病毒感染的靶細(xì)胞。由輔佐細(xì)胞或NK細(xì)胞所產(chǎn)生的IFN可協(xié)同NK的抗病毒作用，而對正常細(xì)胞有保護(hù)作用。另一方面，病毒感染細(xì)胞表面的病毒抗原和其它表面分子使得其對NK細(xì)胞的殺傷作用變得更加敏感。此外，NK細(xì)胞在體外還可殺傷某些細(xì)菌、真菌、原蟲等，可能與NK細(xì)胞釋放某些殺傷介質(zhì)有關(guān)。
3. NK細(xì)胞在免疫監(jiān)視、殺傷突變的腫瘤細(xì)胞可能比T細(xì)胞具有更重要的作用。某些疾病如Chediak-Higashi或X性聯(lián)淋巴增殖綜合征患者，由于NK功能缺陷對惡性淋巴細(xì)胞增殖疾病特別易感。
4. 參與骨髓移植后移植物抗白血病效應(yīng)：在體外NK細(xì)胞可殺傷某些淋巴樣和髓樣白血病細(xì)胞。骨髓移植后數(shù)周內(nèi)，來自供體的NK細(xì)胞在PBL中占相當(dāng)高的比例。此外，在體內(nèi)NK細(xì)胞還可殺傷某些不成熟細(xì)胞如骨髓干細(xì)胞、胸腺細(xì)胞亞群等。
NK細(xì)胞治療方法
????治療流程：
確定患者的入選標(biāo)準(zhǔn)→相關(guān)檢查→血液采集→分離外周血單個核細(xì)胞→培養(yǎng)NK細(xì)胞→獲得NK細(xì)胞→細(xì)胞回輸→療效評估→隨訪
培養(yǎng)方法：
1、治療前檢查血常規(guī)、凝血功能等常規(guī)項(xiàng)目；
2、用血液分離機(jī)采集病人外周血淋巴細(xì)胞或直接采集外周血；
3、在GMP實(shí)驗(yàn)室里，從采集的外周血中分離出單個核細(xì)胞，經(jīng)多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)、激活后進(jìn)行增殖培養(yǎng)，此過程需要9-12天。
4、于培養(yǎng)的第9-13天開始分次回輸NK細(xì)胞，每次回輸過程大概1.5個小時。
5、一個療程約14-16天。此后視情況進(jìn)行下一療程治療。
NK細(xì)胞治療特點(diǎn)
??? 1、可直接識別、殺死癌細(xì)胞，抑制腫瘤的生長及擴(kuò)散；
2、可直接改善和調(diào)節(jié)患者的免疫力和神經(jīng)系統(tǒng)；
3、通過其分泌的因子抑制腫瘤附近新血管的增生，限制腫瘤生長；
4、分泌多種細(xì)胞因子，減少患者疼痛，提高生活品質(zhì)；
5、NK細(xì)胞療法可用于多種癌癥，尤其對血液腫瘤，肺癌、淋巴癌、食道癌、乳癌、肝癌等血流旺盛且血管較密集的腫瘤有很好的療效。
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| 品牌 | 產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品名稱 |
| PALL | AP-4951 | Acrodisc??白細(xì)胞針頭過濾器,10/pkg |
| PALL | AP-4952 | Acrodisc??白細(xì)胞針頭過濾器,50/pkg |
| Peprotech | 900-k25 | Human TNF-α ?ELISA ?Kit |
| Peprotech | 96-200-21 | Human IL-21 |
| Peprotech | 96-200-02 | Human IL-2 |
| Peprotech | 96-200-15 | Human IL-15 |
| Peprotech | 05111-80 | human CD3 |
| Peprotech | 06111-60 | humanCD4 |
| BD | 555332 | human CD3/FITC |
| BD | 557710 | human CD16 ALEXA 647 |
| BD | 555516 | humanCD56/PE |
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